本文介绍如何选择图像中感兴趣的区域并进行测量。
通过前面一些基础概念的介绍,我相信大家已经能够使用 ImageJ 制作出符合规范的能够在论文中展示的图像了。但是一般来说,光有图像可不够,还得有一些定量的分析。
所以这里展示一个最简单的定量分析场景:统计细胞内的荧光信号。如上图所示,我们有一张细胞的明场图像,然后还有一张细胞的荧光图像。如果要统计细胞内的信号,首先就需要圈选细胞,这就涉及到非常重要的一个概念,叫做「感兴趣区域」(Region of Interest,ROI)。
ImageJ 的菜单栏中首当其冲就放了一堆 selection tool,方便大家进行图像选区。可想而知这个功能的基础和重要。然后这些tool分别是不同类型的选择工具,有矩形,椭圆,多边形,手绘,直线,三角和点选等。而对于细胞而言,我们使用手绘比较合适。
由于明场上似乎细胞看得更完整,边缘更清晰一点,所以我们在这里手动圈选出细胞轮廓。绘制完毕后,按快捷键 t
就能把这个 selection 添加到 ROI 管理器,保存起来。接下来点击绿色通道,再点击 ROI 管理器中已经保存的 selection,就能直接 apply 到绿色通道了。
有了这样一个选取,接下来我们就可以做很多测量了。眼尖的朋友应该能看到 ROI 管理器中就存在 Measure 的按钮。不过在 Measure 之前,我们先要告诉 ImageJ,到底想测量哪些指标,因为针对一个选区,有很多可以统计的指标。
这个时候就要点击 Analyze>Set Measurements...
来进行设定。弹出的对话框里面提供许多指标,基本上满足了一般的统计需求:
我们这里勾选面积,信号强度均值,还有最大最小值即可。然后再点击绿色通道的图片窗口,按快捷键 Ctrl+M
就能进行测量。结果会记录在 Results 窗口。
多个细胞的统计可以如法炮制,然后所有的统计数据都记录在 Results 窗口,这个窗口点击 Ctrl+S
就可以把结果保存为 csv 格式的数据表,方便进行后续的分析比较。
最后需要提醒大家的是,这里展示的是手动图像选区测量的方式。好处是非常简单,不依赖任何算法,就可以对感兴趣的区域进行测量。缺点是人工选区无法做到特别精确,而且容易引入人为偏见,所以这种方式通常用于较小数据量的半定量分析,而且务必保存好所有ROI记录(点击ROI管理器窗口,More>Save
)。
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