本文介绍如何将ROI线条膨胀为环状以满足细胞膜信号测量的需求。
在测量细胞膜信号的时候,我们可以手绘一个细胞轮廓,尽可能经过每个信号点。细胞膜的信号是有一定宽度的,如果能够根据这个闭合轮廓线条进行扩张,以完整包含细胞膜信号,则至少可以节省一半的工作量。
如上图所示,先使用 freehand 工具大致选中细胞膜这一圈信号,然后运行下方的代码,就能得到膨胀后的ROI。
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在这段代码中,首先要指定需要进行膨胀操作的ROI的索引(从0开始),然后指定需要进行膨胀的次数。运行代码在ROI管理器中新增一个ROI,点击查看可以看到膨胀后的ROI已经比较好地把信号囊括进去了。
接下来按 Ctrl+M
即可统计这个新ROI范围内的信号情况。
可以看到,膨胀前ROI测量的结果一点都不准确,因为它计算了整个ROI内部大量空白区域的像素值。而膨胀后的ROI其面积为 87.527,其实就是这个环形区域(近似细胞膜区域)。但这个区域的信号可以看到其实也是不连续的,还可以进一步 Threshold,只统计有信号的部分的平均值。
此时,我们可以选中膨胀后ROI,Ctrl+Shift+D
复制出来选区,并且 Clear Outside
来清除ROI选区外的信号,得到这样一张子图:
然后 Ctrl+Shift+T
进行阈值设置:
需格外注意,我这里为了方便展示,使用了自动设置阈值的方式。但实际上应当提前自行确认背景的 threshold。然后所有的数据都统一使用这样的 threshold 来区分信号和背景。如何获得区分信号和背景的像素阈值,可参考下文:
然后 Edit > Selection > Create Selection
基于 threhold 得到的mask创建 selection,并添加到 ROI 管理器,再进行 Measure。
可以看到,按照阈值划分,有效信号实际所占面积为 11.064,其平均信号强度为 164.932。
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